免疫组库(immune repertoire,IR) 是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。传统的免疫组库研究技术通常是用多重PCR技术或5’RACE扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR3区),再结合高通量测序技术实现,但往往只能检测TCR和BCR一条链的序列信息。2015年,10× Genomics发布了基于微流控和油滴包裹技术的Chromium单细胞系统平台,可实现高通量的单细胞转录组和单细胞V(D)J测序。不但可以将TCR/BCR双链完美匹配,而且可以细化到单细胞水平,同时获得表达谱信息。
技术原理
10X Genomic单细胞免疫组库测序是建立在GemCode技术上的微流体平台,将带有条形码和引物的凝胶珠与单个细胞包裹在油滴中;接下来在每个油滴内,凝胶珠溶解,细胞裂解释放mRNA,通过逆转录产生用于测序的带条形码的cDNA。液体油层破坏后,cDNA一分为二,后续同时进行基因表达和免疫组库文库构建;其中TCR或者BCR的V(D)J序列通过设计在TCR或者BCR、lg的C区域的巢式PCR引物进行富集。然后使用Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达和免疫组库数据,实现在单细胞水平同时对基因表达和免疫组库进行研究。
V(D)J重组产生TCR/BCR多样性图
10× Genomics单细胞免疫组库实验原理图
技术优势
分析数百至数万个淋巴细胞,以检测罕见的全长V(D)J转录物和细胞类型亚群;
同时测量来自相同单细胞的配对的TCRα/β和BCR重链/轻链信息和基因表达,精确的H链和L链的组合、α链和β链的组合,性价比更高;
使用直观的软件工具显示免疫库的克隆性,多样性和细胞环境;
应用方向
探索肿瘤免疫微环境,辅助免疫治疗
探索自身免疫性疾病和炎症性疾病发生机制,辅助疫苗的研究
移植和免疫重建
2020-02
2020年2月4日,中共中央政治局常委、国务院总理、中央应对新型冠状病毒感染肺炎疫情工作领导小组组长李克强主持召开领导小组会议。会议指出,要提高检测确诊能力,缩短检测时间,从全国疾控系统调派检测力量支援武汉,允许符合条件的第三方检测机构开展核酸检测。2月5日,中科普瑞积极响应参与… [了解更多]
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