10x Genomics具有通量高、灵活性强、流程简单、技术性能高、单个细胞制备成本低等优势,其技术核心是油滴包裹的凝胶珠(GEM),该系统有75万种barcoded beads,每个bead上有40-80万探针。
技术要点
> 8通道的微流体“双十字”交叉系统
> 含Barcoded RT Primers的Gel Beads、细胞和酶的混合物、油
> 三者结合形成GEMs,即包裹Gel Beads、细胞和酶的混合物的油滴
> GEMs被收集(单细胞捕获率≈65%)
技术流程
>GEM形成后,细胞裂解,凝胶珠自动溶解释放大量barcode序列,随后mRNA逆转录产生带有Barcode和UMI信息的cDNA。
>油滴破碎,cDNA为模板进行PCR扩增,然后进行cDNA打断、加测序接头P5及测序引物R1等传统二代测序的建库过程。
>测序后,得到每个细胞的转录组表达谱,Barcode标记细胞,UMI标记基因并记录表达量。