本研究的ChIP-seq和数据分析均由中科普瑞协助完成。

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率在全球排名第六，死亡率排名第四，每年约有841,000例新发病例和782,000例患者死亡。肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性肝癌，其主要危险因素是乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染，黄曲霉毒素暴露和重度饮酒。因为诊断处于晚期且治疗方案有限，原发性HCC患者的预后和生存率仍较低，需要更彻底地了解肝癌的分子机制，并找到更有效的治疗策略。TCF12参与了细胞生长和分化的调控，有报道称其在多种恶性肿瘤的进展中起癌基因或抑癌基因的作用，但其在肝细胞癌(HCC)中的作用和分子机制尚不清楚。

本实验通过慢病毒感染建立了HCC中TCF12异常表达的稳定细胞系。MTT，集落形成，迁移，侵袭和HUVECs tube形成实验以及原位异种移植模型用于研究TCF12在肝癌细胞中的体内和体外生物学功能。RNA-seq分析被用于探索TCF12调控的靶基因。利用RT-qPCR、蛋白质印迹、双重荧光素酶报告基因分析、Ch-IP、CHIP-seq和功能实验证实TCF12调控的靶基因。最后，通过RT-qPCR，western blot和免疫组化（IHC）分析检测TCF12的表达水平，分析TCF12与下游基因的相关性，以及TCF12在人原发性肝癌中的临床意义。

1. TCF12促进细胞增殖，诱导G0/G1向S期转化

TCF12过表达/敲低的HCC细胞7天生长曲线及细胞集落形成情况

2. TCF12促进肝癌细胞迁移、体外侵袭和体内肺转移

创伤愈合和侵袭实验证明，TCF12的过表达增加了肝癌细胞在体外的迁移和侵袭，沉默有相反作用。

3. CXCR4是TCF12的下游靶基因

转录组测序寻找TCF12可能的靶基因，RT-qPCR和western blot检测HCC细胞中CXCR4的mRNA和蛋白水平，ChIP-seq检测到的峰值信号进一步表明CXCR4可能是TCF12的潜在靶点。

4. CXCL12诱导CXCR4上调激活MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路

Western blot分析磷酸化ERK、AKT和JNK蛋白水平

5. 肝癌患者TCF12表达与CXCR4、CXCL12表达呈正相关，预示较差的预后

TCF12 mRNA与CXCR4或CXCL12 mRNA之间相关性的散点图，Kaplan-Meier分析低/高表达TCF12患者的OS

本研究揭示了一种新的肿瘤发生机制，其中CXCL12-CXCR4参与了HCC中TCF12的促肿瘤功能，从而激活MAPK和PI3K-AKT信号通路，促进了HCC细胞的生长、迁移和侵袭，为HCC提供了有价值的预后标志物。此外，TCF12通过调节CXCL12和CXCR4介导的bFGF表达参与肿瘤微环境中内皮细胞的血管生成。

TCF12 promotes the tumorigenesis and metastasis of hepatocellular carcinoma via upregulation of CXCR4 expression. Theranostics. 2019. 9(20): 5810-5827.