þ  Pyrosequencing甲基化检测服务

焦磷酸测序技术（Pyrosequencing）作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径。中科普瑞为您提供基于QIAGEN公司焦磷酸测序平台的服务。

焦磷酸测序技术原理

       焦磷酸测序技术是由4种酶（DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。

       具体过程如下：

1.     仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP) ；

2.       互补的碱基结合在模板上时，会释放出焦磷酸基团Pyrophosphate (PPi) ；

3.       PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下，合成ATP，ATP作为能量分子，驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素，并发出与ATP能量成正比的荧光信号 ；

4.       信号被CCD数码相机捕捉，形成峰形PyrogramTM；

5.       未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)降解 ；

6.       加入下一种dNTP。

焦磷酸测序实验流程

焦磷酸测序在DNA甲基化中的应用 

²  基因组整体水平的甲基化检测

²  特异位点的甲基化检测

²  寻找新的甲基化位点

焦磷酸测序结果展示