锌指蛋白703通过反式激活CLDN4表达调控EMT，诱导肝癌患者sorafenib耐药

采用免疫组织化学（IHC）检测128对HCC癌及癌旁组织中ZNF703的表达。结果显示，与癌旁组织相比，ZNF703在HCC组织中高表达。分别利用western blot和qRT-PCR验证发现，HCC样品中ZNF703 mRNA和蛋白的表达明显更高。结合临床表征数据分析发现，ZNF703过表达也与预后不良有关，ZNF703高表达患者具有较短总生存期和较高的复发率。

为了评估ZNF703在HCC转移中的作用，研究建立了ZNF703过表达细胞系和敲除细胞系。体外实验发现，过表达ZNF703显著增强了肝癌细胞的迁移和侵袭活性，敲降ZNF703结果与之相反。体内转移实验表明，ZNF703在肝癌细胞中过表达显著增加了转移率和肺转移结节的数量。同时，细胞中ZNF703的下调显著增加了异种移植小鼠的总生存时间。这些数据表明，ZNF703增强了HCC的侵袭和转移能力。

EMT在HCC转移中起重要作用。免疫荧光及Western blot结果表明，与对照组相比，ZNF703的过表达降低了E-cadherin，上调了vimentin的表达，提示ZNF703可诱导肝癌细胞发生EMT。为了进一步探讨ZNF703影响肝癌转移和侵袭的分子机制，利用RNA测序分析mRNA表达谱差异，发现了ZNF703过表达增加CLDN4的表达，敲降下调CLDN4表达。最终，生物信息学分析结合荧光素酶报告及ChIP实验确定了CLDN4是ZNF 703的直接作用靶点。

通过体外细胞实验及体内裸鼠成瘤模型，研究CLDN4在HCC细胞中的作用。结果表明，CLDN4过表达可促进HCC的侵袭和转移。

通过下调CLDN4表达看是否可逆转ZNF703过表达引起的EMT上调，验证CLDN4是否参与了ZNF703介导的HCC侵袭和转移。CLDN4的过表达恢复了ZNF703沉默引起的迁移和侵袭力的降低，而CLDN4的敲低则减弱了ZNF703促进的迁移和侵袭力。由此得出，ZNF703通过激活肝癌细胞中CLDN4的表达来诱导EMT。

菌落形成实验显示，sorafenib可显著降低肝癌细胞的增殖。此外，体内抗肿瘤实验表明， shZNF703+sorafenib组的肿瘤负荷显著下降，这表明ZNF703的敲降增强了sorafenib对皮下肿瘤生长的影响。免疫组化结果与体内结果一致。