一、单细胞分选

1. 基于流式细胞术对单细胞的分选

流式细胞术样品制备大致可分为下面五个步骤：

1）取材：取手术或活检组织必须具有代表性，如取手术肿瘤组织，必须取瘤细胞生长旺盛部位；组织等标本必须在取材后保持样本的新鲜；一般在室温1个小时之内处理好样本或及时用固定剂或低温对组织进行保存；

2）对细胞的待测生物化学成分进行荧光染色；

3）按照厂家提供的软件程序对样本进行获取、检测和存储；

4）再依照软件提供的程序对检测结果进行定量分析；

5）检测分析结果在生物、医学上的意义进行分析和评价。

2. 物理方法分离单细胞

光学显微镜下通过毛细管虹吸的方法获得单细胞，直接将毛细管折断后裂解在特定介质中，-80℃冰箱保存，干冰运输。物理方法分离单细胞对硬件和操作的熟练程度要求较高。

3. Fluidigm C1分离单细胞

Fluidigm基于其专利的微流体技术开发了一种全新的单细胞基因表达检测方法，可以使你快速可靠地分离、处理、对单一细胞的基因组进行分析。仪器、芯片、试剂、软件、试剂盒整合的系统可以自动完成从细胞捕获、裂解、逆转录、预扩增，到最终检测和分析细胞活动的全部流程。Fluidigm新推出的C1单细胞自动制备系统和已在单细胞基因表达分析中广泛被采用的BioMark™ HD微流体PCR系统组成。C1单细胞自动制备系统可以同时捕获96个的细胞，在同一张芯片上完成细胞捕获、裂解、逆转录及预扩增的全过程。

二、单细胞样本的处理建议

单个细胞或小于100个细胞，细胞分离后加到 1µL 不含Mg²⁺和Ca²⁺的1×PBS溶液中，-70度或液氮速冻，干冰运输。若是培养的大量细胞，可以先用不含Mg²⁺和Ca²⁺的1×PBS溶液清洗细胞后在加到 1µL 不含Mg²⁺和Ca²⁺的1×PBS溶液中，-70度或液氮速冻，干冰运输。