2012 年，由美国和瑞典的科学家共同开发了称为 Smart-Seq（Switching mechanism at 5’end of the RNA transcript）的技术。在 2013 年，Nature Methods 杂志上报告了新的方案，被称为 Smart-Seq2，随后在 2014 年他们有公布了详细的操作流程 。获取单细胞并裂解细胞后，含有 oligo-dT 的引物与 mRNA 的 poly- A 结合，逆转录酶 MMLV 进行逆转录，逆转录酶到达 mRNA 5’末端时，MMLV 的末端转移酶活性会在一链 cDNA 的 3'末端增加额外的胞嘧啶，这时 TSO 引物 3' 末端的 rGrG+ G 结合到第一链末端的胞嘧啶，然后以第一链 cDNA 为模版进行延伸合成互补的第二链，全长 cDNA 经过 PCR 扩增后进一步进行测序文库的构建。

SMART-seq技术优势

起始量低：1 个细胞起始，适用于难以满足 10X Genomics 等平台起始细胞量要求的样本。

覆盖度高：测序覆盖 cDNA 的全长序列，每个细胞能够获得上万个基因的表达。

信息全面：除了获得基因表达信息，数据能够用于可变剪接，cSNP 等分析，以及带 poly- A 结构的 lncRNA 研究。

SMART-seq样本要求

类型： 新鲜组织，原代细胞，细胞系等。

来源： 血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

样本量： 单个细胞（或微量细胞）。

保存运输： 细胞放入 SMART-seq 试剂盒指定的裂解液中，-80°C 保存，干冰运输。