þ Pyrosequencing甲基化检测服务
焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)作为一种新的序列分析技术,能够快速地检测甲基化的频率,对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测,为甲基化研究提供了新的途径。中科普瑞为您提供基于QIAGEN公司焦磷酸测序平台的服务。
焦磷酸测序技术原理
焦磷酸测序技术是由4种酶(DNA 聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶)催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。
具体过程如下:
1. 仪器向待检测样品中每次只加入一个核苷酸碱基(dNTP) ;
2. 互补的碱基结合在模板上时,会释放出焦磷酸基团Pyrophosphate (PPi) ;
3. PPi在ATP硫酸化酶(ATP Sulfurylase)作用下,合成ATP,ATP作为能量分子,驱动荧光素在荧光素酶(Luciferase)的催化下转化为氧化荧光素,并发出与ATP能量成正比的荧光信号 ;
4. 信号被CCD数码相机捕捉,形成峰形PyrogramTM;
5. 未与模板结合的碱基将被三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)降解 ;
6. 加入下一种dNTP。
焦磷酸测序实验流程
² 基因组整体水平的甲基化检测
² 特异位点的甲基化检测
² 寻找新的甲基化位点
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